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細(xì)胞凍存液的配制方法和注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2020-10-09 點(diǎn)擊次數(shù):2714
 
  細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。
  細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是*的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。
  細(xì)胞凍存常用凍存液的成分如下:
  20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆谩?/div>
  注意事項(xiàng):
  1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過(guò)濾除菌。
  2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。
  3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
  DMSO在凍存液中的作用: DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜,降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲,避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點(diǎn)下降,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。

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