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Lonza支原體檢測試劑盒的操作步驟

更新時間:2018-04-09 點擊次數(shù):2781
對于Lonza支原體檢測試劑盒的操作使用,小編發(fā)現(xiàn)許多人都還不是很了解該如何正確的操作,今天呢小編就給大家講一下Lonza支原體檢測試劑盒的詳細(xì)操作步驟吧
Lonza支原體檢測試劑盒操作步驟: 
貼壁細(xì)胞:1.被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時,接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對照。2.5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,3.吸去固定液,晾干。4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細(xì)胞:1.收集需檢測的細(xì)胞,1500rpm,5min。2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。3.吸去固定液,晾干。4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。5.吸去Hoechst 33258工作液,用無菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以蓋玻片覆蓋。6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。結(jié)果判斷(參考):陰性:僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。陽性:除細(xì)胞外,細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
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